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    近日，中國水稻研究所水稻染色體工程及基因組編輯創(chuàng)新團隊與蘇州大學(xué)黃健課題組合作，創(chuàng)建了一種簡單高效的基因編輯突變體篩選方法。相關(guān)研究成果于4月4日在線發(fā)表于《遺傳學(xué)報（Journal of Genetics and Genomics）》雜志。
    隨著CRISPR-Cas9基因組編輯技術(shù)的廣泛應(yīng)用，科研人員需要進行大量的突變體篩選工作。目前通常的篩選方法包括對PCR產(chǎn)物限制性酶切、T7E1酶切、PAGE分析、溶解曲線分析等，這些方法存在著耗時費錢、位點特異或者需要特定儀器等缺點。因此，迫切需要開發(fā)一種簡單高效的篩選方法。
    PCR是分子生物實驗的一種常規(guī)技術(shù)，主要由變性—退火—延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。其中，特異性的引物以及適宜的退火溫度是PCR反應(yīng)能否成功擴增的關(guān)鍵因素。科研人員通過設(shè)計基因編輯位點特異引物，首先以野生型脫氧核糖核酸（DNA）為模板進行一次梯度PCR尋找出特異引物的臨界退火溫度，再在臨界退火溫度下進行PCR擴增篩選突變體。由于該特異引物不能和突變體DNA嚴格匹配，導(dǎo)致在臨界退火溫度下突變體中的PCR反應(yīng)不能有效進行擴增。因此最終只需進行一次常規(guī)的PCR反應(yīng)，便可以靈敏地檢測出成功編輯的突變體。利用ACT-PCR，研究人員不僅在水稻中快速鑒定出單突變體和多突變體，同時也在斑馬魚中成功鑒定出突變體，表明ACT-PCR的應(yīng)用不受物種的限制。除用于基因編輯突變體鑒定之外，研究還發(fā)現(xiàn)結(jié)合實時熒光定量PCR技術(shù)，ACT-PCR還可用于定量計算在細胞系中進行的基因編輯效率，與常用的PCR產(chǎn)物酶切等方法相比，通過定量ACT-PCR得到的數(shù)據(jù)更為接近于真實的編輯效率。
    該研究得到國家自然科學(xué)基金以及中國農(nóng)科院科技創(chuàng)新工程經(jīng)費資助。水稻所所華宇峰、王春和蘇州大學(xué)黃健為該論文的共同第一作者，王克劍研究員為通訊作者。（通訊員 陳鎏琰）

    文章鏈接：
    http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1673852717300577